Un nuovo biosensore per misurare l’attività della plasmina

La fibrinolisi è un processo cruciale per la dissoluzione dei coaguli di fibrina e il ripristino della permeabilità vascolare. La plasmina, proteasi serica chiave, catalizza la degradazione della fibrina innescando una cascata di reazioni proteolitiche. Attualmente, gli strumenti disponibili per valutare la generazione di plasmina presentano limitazioni significative in termini di efficienza, specificità e capacità predittiva dei disturbi fibrinolitici. Lo studio propone FPS, una proteina ricombinante basata sul principio del quenching della risonanza di trasferimento di energia per fluorescenza (FRET), che consente il monitoraggio real-time della generazione di plasmina mediante perdita del segnale di quenching energetico durante l'idrolisi. Il disegno sperimentale ha confrontato FPS con sensori peptidici tradizionali utilizzando saggi di generazione di plasmina basati su plasma, valutando l'interazione con fattori fibrinolitici (attivatori del plasminogeno, inibitori della plasmina) e con inibitori (α2-macroglobulina, α2-antiplasmin, inibitori dell'attivatore del plasminogeno-1). I risultati principali evidenziano che FPS presenta un'efficienza catalitica superiore rispetto ai sensori peptici, è resistente all'inibizione da α2-macroglobulina e interagisce specificamente con il dominio kringle 5 della plasmina. Nei saggi di plasma coagulante, la generazione massima di plasmina si verifica dopo il picco di formazione del coagulo. L'inibizione farmacologica dell'antiplasmina mediante anticorpi specifici aumenta significativamente la generazione di plasmina, mentre trattamenti con aprotinina e acido tranexamico la riducono in modo dose-dipendente. L'assenza di fibrina riduce marcatamente la generazione di plasmina, sottolineando l'importanza del substrato nella reazione. La variabilità interindividuale nei volontari sani è minima (range di variazione 2 volte per picco, tempo al picco e potenziale endogeno), indicando una buona standardizzazione del metodo. A differenza dei sensori peptidici precedenti, FPS non manifesta effetti inibitori sulla lisi del coagulo, rendendolo uno strumento non-interferente per la misurazione funzionale.