Riposizionamento di farmaci approvati dalla FDA come potenziali inibitori della 3CLpro del virus della peritonite infettiva felina: uno studio integrato in silico e in vitro con analisi di combinazioni sinergiche

Lo studio rappresenta un approccio metodologicamente robusto al problema terapeutico della FIP, utilizzando una strategia di drug repurposing che sfrutta farmaci già approvati per il trattamento di altre patologie. La metodologia combina il virtual screening computazionale con validazioni sperimentali multiple, creando una pipeline di ricerca traslazionale articolata. Il disegno sperimentale prevede tre fasi principali: screening virtuale della libreria di farmaci FDA-approvati contro la struttura cristallografica della 3CLpro del coronavirus felino, quindi validazione in vitro su colture cellulari CRFK (Crandell Rees Feline Kidney) utilizzando molteplici parametri di citotossicità virale inclusi effetto citopatico, immunoperossidasi e RT-qPCR quantitativa, e infine un saggio reporter dual-luciferase intracellulare specificamente progettato per misurare simultaneamente la penetrazione cellulare e la stabilità metabolica dei composti. I risultati quantitativi evidenziano che saquinavir presenta la maggiore potenza inibitoria sulla 3CLpro (IC50: 23,70 ± 1,38 µM), seguito da lumacaftor (38,68 ± 1,59 µM) e gliquidone (82,52 ± 1,50 µM). L'analisi di sinergia utilizzando l'algoritmo SynergyFinder 3.0 ha rivelato interazioni sinergiche eccezionalmente forti: saquinavir combinato con GC376 (protease inhibitor specifico per FCoV) ha raggiunto uno ZIP score medio di 54,59, indicando una sinergia molto superiore all'additività. Particolarmente rilevante è il dato che le combinazioni sinergiche ottimali raggiungono 0,97-2,03 log10 di soppressione virale utilizzando solamente il 20-50% dei valori di EC50 individuali, riducendo drasticamente l'esposizione ai farmaci. Nel contesto clinico più ampio, la FIP rimane una malattia felina con prognosi grave, poiché i trattamenti convenzionali sono limitati e costosi; questo studio offre una possibilità di ridurre significativamente i costi e gli effetti avversi attraverso combinazioni a dosi ridotte. La letteratura esistente su FIP ha recentemente beneficiato dell'introduzione di agenti come GC376 e remdesivir, ma la loro disponibilità rimane limitata geograficamente e i costi proibitivi per molti proprietari di animali domestici. L'approccio di repurposing di farmaci già disponibili rappresenta quindi una soluzione pragmatica che potrebbe accelerare l'accesso terapeutico.