Verifica Analitica Standardizzata del Test di Mutazione ESR1 nel ctDNA nel Cancro al Seno Metastatico HR+/HER2-: Uno Studio Multicentrico Europeo Utilizzando dPCR e Liquid Biopsy Basata su NGS

Le mutazioni attivanti di ESR1 rappresentano un meccanismo di resistenza clinicamente rilevante agli inibitori dell'aromatasi nel cancro al seno metastatico HR+/HER2-, influenzando significativamente le strategie terapeutiche e l'esito dei pazienti. Le linee guida internazionali (ASCO, NCCN, ESMO) raccomandano unanimemente la liquid biopsy come approccio preferenziale per il test ESR1 al momento della progressione sulla terapia endocrina, riconoscendo i vantaggi della biopsia liquida rispetto alle biopsie tessutali invasive nel monitoraggio della malattia metastatica. Sebbene elacestrant sia stato approvato dalla FDA in combinazione con Guardant360® Dx come diagnostica companion, i framework normativi europei consentono l'utilizzo di saggi in-house validati, sempre più diffusi nei laboratori clinici. Questo studio multicentrico ha coinvolto sei istituzioni di riferimento europee nel processo di standardizzazione analitica delle metodologie dPCR e NGS. La metodologia prevedeva l'utilizzo di materiali di riferimento standardizzati contenenti mutazioni ESR1 clinicamente rilevanti, in particolare i mutanti hotspot p.Y537S e p.D538G, i più frequentemente testati nella pratica clinica. L'input di DNA totale variava da 10 a 30 ng per reazione nei saggi dPCR, mentre per NGS seguiva i requisiti specifici della piattaforma. I valori di LoD si attestavano tra 0,01-0,07% VAF per dPCR e 0,01-0,1% per NGS, evidenziando prestazioni comparabili tra diverse piattaforme quando eseguite in condizioni di laboratorio validate. I limiti del bianco erano bassi, con segnale di background minimo nei campioni plasmatici di donatori sani. Lo studio dimostra che sia i flussi di lavoro basati su dPCR che su NGS possono essere implementati con successo per il test ESR1 nella pratica clinica di routine utilizzando saggi validati localmente. Questi risultati forniscono una guida pratica fondamentale per la verifica dei saggi, i requisiti di input del DNA e i parametri analitici chiave necessari per garantire il rilevamento affidabile delle mutazioni ESR1 nei laboratori europei.